5.3. ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

Особенность жидкостной хроматографии (ЖХ) — жидкая подвижная фаза. В классической жидкостной хроматографии, предложенной М. С. Цветом в начале XX века (1903г.), использовали стеклянные колонки, имевшие внутренний диаметр от 1 до 5см и длину от 50 до 500см. Для обеспечения достаточных скоростей потока (до 1мл/мин) использовали частицы размером 150-200 мкм. При этом, однако, разделение часто занимало много времени.

Попытки увеличить скорость потока иотользованием вакуума или насосов не позволяли добиться существенного улучшения, поскольку, как уже известно из теории хроматографии, простое увеличение линейной скорости потока подвижной фазы приводит к снижению эффективности колонки. Достаточно быстро пришли к заключению, что более высокая эффективность может быть достигнута лишь уменьшением размера частиц сорбента. Также было понятно, что требуемое для малых размеров частиц давление не может быть достигнуто с помощью обычного оборудования для ЖХ.

Кардинальные изменения произошли в конце 1960-х годов, когда были введены в употребление частицы диметром от 3 до 10 мкм и новое поколение оборудования. Классическая жидкостная хроматография используется в настоящее время в препаративных целях, а также для демонстрационных экспериментов. В этом разделе будут рассмотрены наиболее важные элементы скоростной жидкостной хроматографии — высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

5.3.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

Принципы разделения и эффективность

Разделение С использованием жидкой подвижной фазы могут быть основаны на четырех принципах:

— адсорбция;

— распределение;

— ионный обмен;

— эксклюзия.

D Аффинная хроматография может рассматриваться как пятый принцип разделения а ЖХ. Этот аид разделения основан на специфических взаимодействиях между молекулами отделяемого вещества и молекулами, закрепленными на неподвижной о)»зе. Например, антитела, иммобилизованные на неподвижной фазе, специфически взаимодействуют с определенным белком из пробы.

Исторически первым использованным принципом разделения была адсорбция в форме жидко-твердофазной хроматографии. Она служит для разделения неполярных веществ, изомеров и соединений таких классов, как, например, алифатические углеводороды и алифатические спирты. Принцип распределения используется в жидко-жидкостной хроматографии. К этому методу относится нормалъно^фазоеая и обращенно-фазовая хроматография. Последний

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию