диффузии определяемое вещество транспортируется в мембрану и там разрушается ферментом, образуя продукт, который затем можно детектировать оптически или электрохимически. Условием получения линейной зависимости между концентрацией н сигналом является, однако, наличие кинетики псевдопервого порядка [7.4-5]. Другими словами, концентрация получаемого продукта, достигающего поверхности детектора, должна быть значительно меньше, чем константа Михаэлиса—Ментен. Так как эта константа для большинства ферментных систем имеет величину порядка 1 ммоль/л, а многие основы пробы (например, человеческая сыворотка или кровь) содержат значительно большие концентрации, то использование ферментных сенсоров в статических (непроточных) условиях часто осложняется необходимостью введения дополнительных мембранных слоев, чтобы ограничить диффузию определяемого вещества в ферментный слой, или в случае электрохимических детекторов — химически модифицированных электродов, в которых перенос электрона регулируется подходящим медиатором.

□ Условия для кинетики псевдопервого порядка можно создать, регулируя вре-

мя, в течение которого проба действует на сенсор, т. е. регулируя скорость потока в системе ПИА.

Однако при работе в ПИА степень превращения можно просто отрегулировать с помощью времени, в течение которого определяемое вещество воздействует на ферментный слой, и, следовательно,* можно прямо управлять количеством превращенного определяемого вещества, регулируя скорость потока в системе ПИА. Этот подход показан на рис. 7.4-5,с, где изображена система для определения глюкозы с помощью амперометрического сенсора (GE), содержащего глюкозооксндазу, а на рис. 7-4-5,6 приведены градуировочные графики для трех различных скоростей потока. Увеличивая скорость потока от 0,5 до 1,0 мл/мин, линейный диапазон измерений можно легко расширить от

Рис. 7.4-5. о— пстжорасглределительная система ПИА для определения глюкозы с амперометрическим сенсором, детектирующим ферментативно генерируемый пероксид водорода; б—градуировочные графики для глюкозы в диапазоне концентраций 0-40ммоль/л прн трех различных скоростях потока: (А) 0,50, (А) 0,75 и (х) 1,00 мл/мин [7.4-5].

а

б

Глюкоза, ммоль/л

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию