7.4.7. Системы ПИА с ферментами

□ В ПЙА выгодно использовать иммобилизованные ферменты в набивных реакторах.

Использование иммобилизованных ферментов, помещаемых в небольшие колоночные реакторы, в режиме ПИА не только повышает селективность, экономичность и стабильность за счет иммобилизации, но также обеспечивает строгую повторяемость, а следовательно, и постоянную степень преобразований от цикла к циклу. Кроме того, за счет высокой концентрации фермента, иммобилизованного в малом объеме, достигаемая высокая активность фермента облегчает быструю конверсию субстрата при минимальном разбавлении пробы, а малый коэффициент дисперсии в свою очередь приводит к более низкому пределу обнаружения. Ферменты, необходимые для конкретного анализа, могут быть включены в один набивной реактор или в последовательно соединенные реакторы, чтобы реализовать требуемую последовательность превращений или обеспечить оптимальные условия для реакций, протекающих в индивидуальных реакторах. Для контроля за этими реакциями можно использовать как оптические, так и электрохимические детекторы. Так, для оксидаз, которые генерируют пероксид водорода, можно использовать детектирование хем и люминесценции, основанное на реакции с люминолом.

□ Хеми-/биолюминесценция и ПИА образуют идеальное сочетание, поскольку люминесцентные реакции дают нестационарное испускание.

Хем и- и биолюминесценция особенно привлекательны как способ детектирования, в первую очередь благодаря потенциально высокой чувствительности и широкому динамическому диапазону люминесцентного метода, а также из-за простоты требуемого оборудования. Более того, люминесценция имеет дополнительное гфеимущество перед другими оптическими методами: поскольку свет испускается и детектируется только при наличии пробы, нет никаких проблем с контрольным опытом.

□ Использование ферментов—звено в аналитической цепи, обеспечивающее селективность, тогда как ПИА—это мощное средство количественной оценки.

В то же время люминесцентные реакции обычно дают нестационарное испускание, потому что интенсивность испускаемого света пропорциональна скорости реакции, а не концентрации вещества (рис. 7.4-10). Следовательно, излучение наиболее часто испускается в виде вспышки, интенсивность которой быстро уменьшается, и по этой причине общепринятым способом определения является интегрирование интенсивности в течение определенного периода времени и установления связи интеграла с количеством определяемого вещества. Очевидно, однако, что если интенсивность света c\E/c\t можно измерить при точно определенных и воспроизводимых условиях, так что все пробы будут обработаны — физически или химически — одинаковым образом (т. е. измерения будут выполнены при идентичных временах задержки t\, рис. 7.4-10), то можно непосредственно связать любое значение dE/dt (предпочтительно то, которое соответствует максимальному испусканию, Л*) с концентрацией определяемого вещества. Это достижимо за счет ПИА, н, следовательно, сочетание

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию