иммобилизованном слое преобразователя; и подобно тому, как в электрохимических методах можно использовать косвенные измерения и медиаторы, дли оптических систем можно применять метки. Однако в оптическом анализе такие метки могут быть «пассивны» или сами реагировать с определяемым веществом или продуктом биореакции. Многие из этих возможностей анализа обсуждались в предыдущих главах.

□ Оптические метки могут быть «пассивными» индикаторами или принимать

Как правило, в устройствах с визуальным детектированием используются хромогенные, окрашенные реагенты-метки, тогда как красители для иммунного анализа обычно являются производными флуоресцеина. Производные флуоресцеина далеко не идеальны для сенсорных приложений, поскольку они рН-чувствительны и имеют короткую длину волны возбуждения (АВОЗб), что накладывает ограничения на используемые оптические материалы. Более предпочтительны флуорофоры с большей Аао3б и достаточным стоксовым сдвигом (например, Техас красный). Измерять можно или непосредственно интенсивность флуоресценции, или, если протекает реакция тушения (например, тушение флуорофоров кислородом), время жизни флуоресценции. В этом случае уравнение Штерна—Фольмера принимает вид

где К—константа тушения, а т — время жизни флуоресценции [7.8-47, 7.8-48]. Следует помнить, что в анализе с биораспознаванием зависимость тушения может быть подвержена серьезным помехам, поэтому следует хорошо продумать конструкцию слоев, чтобы избежать этого.

В целом, желательно использовать метки с длинноволновыми максимумами поглощения и испускания. Это предпочтительно как в случае применения световодов (поскольку наиболее общедоступные волокна плохо пропускают свет с длиной волны короче 420 нм), так и во всех других устройствах (потому что простые и наиболее дешевые источники света — светодиоды н диодные лазеры—имеют обычно длину волны больше 450нм). Работа в длинноволновой области может также иметь дополнительные преимущества благодаря более низкому флуоресцентному фону и более высокой чувствительности имеющихся сротодетекторов. Следует помнить, что не всегда удается работать в этих рамках и что некоторые из наиболее чувствительных маркирующих реагентов действуют в коротковолновой области.

Интерпретация сигнала

Рассмотрим пример, в котором метка взаимодействует с определяемым веществом. Если взаимодействие между ними можно описать просто в соответствии с равновесием

участие в реакции с определяемым веществом.

^ = l + if[Sl

(7.8-17)

A + Li=t АЬ

(7.8-18)

так что

(7.8-19)

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию