(схема 7.8-7). В предыдущем разделе «Оксидазные электроды» (см. с. 535) мы обсуждали амперометрическое определение глюкозы, основанное на использовании пероксида водорода либо синтетического медиатора. Ранее в этой главе биоанализ включал также применение пероксида водорода, но в этом случае пероксид определяли с помощью другой реакции, приводи щей к образованию окрашенного комплекса в присутствии пероксида. «Тест-полоска» оптического биосенсора должна включать все реагенты для этого биоанализа в иммобилизованном виде. Пробу помещают на полоску и контролируют развитие окраски с помощью устройства, содержащего источник света и детектор. В этом случае образующийся хромогенный комплекс служит меткой; это «активная» метка, поскольку она участвует в реакции с пероксид ом, но, в отличие от рассматриваемых выше процессов (уравнения 7.8-18-7.8-23), ее образование представляет собой быстрый необратимый процесс, протекающий наряду с основной ферментативной реакцией. Существует линейная зависимость между сигналом н концентрацией пероксида: его концентрация зависит от кинетики ферментативного процесса, а не от кинетики развития окраски.

В другом примере используют ферментативную реакцию, которая включает изменение |Н+] (см., например, схемы 7.8-2 и 7.8-14). Здесь меткой будет то вещество, оптические свойства которого изменяются вместе с рН- В этом случае этап маркирования является равновесным (уравнение 7.8-17); это значит, что линейная зависимость между определяемым веществом н сигналом возможна только при определенных условиях. На выбор рН-индикатора влияет интересующий нас диапазон рН и рКл иммобилизованного хромофора /флуорофора (который может быть иным, чем для раствора). Существует большое число таких соединений для различных диапазонов рН и с различными спектральными характеристиками, так что возможность комбинаций реакций высока. Однако, как упомянуто в предыдущем разделе, посвященном по-тенциометрическим измерениям, проблема, связанная с контролем реакции по изменению рН, состоит в том, чтобы характеризовать собственный рН пробы, ее буферную емкость и чувствительность равновесия к ионной силе, — каждая из этих характеристик оказывает значительное влияние на определение и должна быть принята во внимание при интерпретации результатов. Эти осложнения могут также сделать схему неподходящей.

Тем не менее, оптическую схему можно построить таким же образом, как "электрохимические сенсоры, использующие отклик от косубстрата или продукта ферментативной реакции. Многие из схем анализа, обсуждаемых в предыдущих главах, подходят для такого преобразования. Например, ксантинокси-

б

Пенициллин

Т мочевина

I

Пенициллиназа

■ Уреаза

Пенициллат + Н+ NH4* + hc03"

Схема 7.8-14. Ферментативные реакции, связанные с изменением рН.

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию