7.9.

ИММУННЫЙ АНАЛИЗ

Цели изучения

• Изучить равновесия антитело-антиген и их использование в анализе.

• Понять различные варианты иммунного анализа.

• Ознакомиться с тем, как можно проводить иммунный анализ с использованием меток.

□ Антитело представляет собой белок со специфичным доменом, связывающим антигены.

□ Антигены—это молекулы, способные вызывать иммунный ответ.

Иммунный анализ использует уникальную специфичность антитела, свя-зьшающего антиген, с целью селективно распознать и определить вещества, которые являются или антителами, или антигенами. Можно добиться высокой селективности иммунного анализа, потому что другие соединения в пробе распознаваться не будут. Антитела представляют собой один из главных классов белков, объединенных названием иммуноглобулины (lg). Внутри этого семейства наиболее представительными антителами являются IgG (~ 70%), Y-образный белок, состоящий из двух идентичных, связанных дисульфидными мостиками гетеродимеров с тяжелой и легкой цепями (рис. 7.9-1). Имеются два антигенсвязывающих (активных) центра, образованные вариабельными глобулярными доменами тяжелой и легкой цепей в Fab-области; специфичность этих центров к связыванию антигена определяется аминокислотами областей, определяющих комплементарность. В связывающей полости имеется максимум 17 аминокислот, так что активный центр антигена должен иметь размеры такого же порядка. Антиген не обязательно должен быть белком; это может быть любая макромолекула, которая способна индуцировать иммунный ответ и, таким образом, вызвать образования антител против нее. Молекулы с низкой молекулярной массой (такие, как гормоны или наркотики, являющиеся предметом анализа) не являются антигенными, но можно создать антитела с активными центрами, специфичными к этим молекулам, соединяя их с белковым носителем. Такие низкомолекулярные соединения известны как гаптены.

Антитела продуцируются В-лимфоцитами, причем каждая В-клетка проявляет на своей поверхности только одну специфичность, так что инородный антиген связывают только клетки с «подходящими» активными центрами. Это связывание стимулирует деление таких клеток и образование большого количества IgG с той же специфичностью. Активный центр может быть лишь небольшой частью всей молекулы антигена, и, таким образом, у одного и того же антигена может быть несколько потенциальных активных центров. Результатом этого процесса становится образование сыворотки, содержащей неоднородную смесь частиц антител с разнообразным сродством. Такие сыворотки известны как поликлональные и, в отличие от моноклональных антител, в их кинетику распознавания вносит свой вклад каждый из активированных распознающих центров или эпитопов.

7.9.1.

Введение

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию