ния этой операции (см. ниже) могут различаться, но при этом всегда следует учитывать ограничения, налагаемые равновесием связывания н необходимым динамическим диапазоном.

Варианты анализа

О Иммунный анализ основан на измерении доли занятых активных центров.

Любой иммунный анализ базируется на измерениях доли занятых активных центров. Другими словами, принцип анализа основан на определении доли занятых центров, или косвенно—доли незанятых центров. Как будет показано в этом разделе, рассмотрение доли занятых активных центров антител приводит к заключению, что, если измеряют оставшиеся незанятыми центры, максимальной чувствительности достигают, когда концентрация антитела стремится к нулю; варианты, удовлетворяющие этому условию, обычно называют «конкурентными». Напротив, методы, в которых напрямую измеряют занятые центры, требуют высоких уровней антител и называются «неконкурентными». Следует, однако, сознавать, что эти термины несколько субъективны, поэтому возникает парадокс, особенно для «неконкурентного» варианта, когда анализ может быть отнесен к любой из двух категорий в зависимости от выбранного этапа. Поэтому важно помнить, что эти довольно двусмысленные термины используют применительно к этапу первичного распознавания. Из-за различных условий оптимизации конкурентный и неконкурентный иммунный анализы могут значительно отличаться в выполнении для данного диапазона концентраций: эти различия следует рассматривать при выборе оптимального варианта для конкретного приложения.

Конкурентный анализ

□ Конкурентный иммунный анализ включает конкуренцию между определяемым веществом пробы и меченым определяемым веществом за ограниченное число активных центров.

В конкурентном иммунном анализе устанавливают число центров, не занятых пробой; он может иметь различные варианты, но суть в том, что определяемое вещество пробы смешивают с меченым определяемым веществом, и они конкурируют за активные центры (рис. 7.9-4). Метод требует разделения связанного и свободного антигена или антитела с целью определения их относительных количеств. Если определяют антиген, присутствие меченого антигена позволяет оценить относительное разделение. Как можно заключить из кривых иа рис. 7.9-3, оптимальная чувствительность достигается при уменьшении концентраций меченого антигена и антитела.

Рассмотрим сигналы компонентов в конкурентном анализе: сначала обсудим условия, когда проба отсутствует и сигнал, относящийся к связанным антителу-антигену в присутствии только меченого антигена, определяется уравнением

_ [Ab-Ag]

(7-9"7)

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию