деляется степенью связывания. Однако в присутствии пробы (немеченого антигена):

[Ago6uJ = [Ag*6uJ + [А6:бщ] (7.9-9)

[Ab-Ag] = [Ab-Ag'] + [Ab-Ag*] (7.9-10)

[Ag] = [Ag*] + [Ag*] (7.9-11)

где Ag* — антиген пробы, a Ag* — меченый антиген.

Для данной концентрации меченого антигена сигнал связанного антигена Ag* уменьшается при небольшой добавке антигена пробы (немеченого) [AAg*].

Из кривых на рис. 7.9-5 очевидно, что изменение сигнала в результате [AAg*] является функцией концентрации антитела, используемой в анализе (рис. 7.9-5,6), и что уровень антител, дающий максимальную чувствительность, зависит от концентраций меченого и определяемого антигена. Традиционно системы иммунного анализа имеют тенденцию давать погрешность при высокой концентрации реагента со степенями связывания 0,4-0,5. Действительно, из рис. 7.9-3,о и б, видно, что связывание в этой области (0,4-0,5) слишком велико, чтобы привести к большому изменению степени связывания антигена при низкой концентрации последнего. Однако нельзя игнорировать сигнал, относящийся к неспецифическому связыванию, поэтому чувствительностью поступаются в пользу более низких помех за счет неспецифического связывания при более высоких концентрациях антител.

Хотя конкурентный вариант иммунного анализа имеет свои преимущества и очень популярен, он имеет и практические ограничения. Очевидным недостатком является то, что маркирование определяемого вещества Ag* может изменить или даже полностью устранить способность связываться с АЬ; вторая опасность особенно существенна, если маркирование включает в связы-

Ь0

Рис. 7.9-5. а — кривая разбавления антитела для меченого антигена Ag* и влияние добавления небольшого количества немеченого антигена Ag*; б — изменение связывания ДЬ вследствие добавки AAg* при различных исходных степенях связывания.

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию