тоду анализа. Например, основным требованием может быть скорость и простота использования, а не чувствительность или воспроизводимость. Может требоваться количественный результат, либо результаты по принципу «да-нет» Все эти критерии меняют общую схему анализа, и метод разделения связанное и свободной метки в анализе должен отражать эти потребности.

ч

Жидкая фаза

Декантация

По сути дела это простейший метод разделения; подходит и любой другой из подобных методов (процеживание, удаление жидкости и т. д.), но на практике их применение может быть связано с трудностями; для получения адекватных результатов каждый анализ требует модификации системы и методики.

Осаждение

Осаждение иммуноглобулинов легко осуществить «высаливанием» при нейтральном рН, при котором они малорастворимы, так что в случае меченого антигена связанную метку можно осадить из раствора вместе с оставшимся свободным антителом, оставляя, таким образом, свободную метку на поверхности. В качестве соли предпочитают использовать сульфат аммония, но недостатком метода в таком случае является высокий уровень неспецифического связывания.

Лучшим осадителем служит полиэтиленгликоль (ПЭГ). Его действие подобно действию соли, отбирающей воду из структуры IgG и вызывающей ее денатурацию, в результате чего и происходит осаждение из раствора, но ПЭГ обеспечивает лучший контроль над системой. Метод широко используют в определениях ряда гормонов и стероидов различного типа, в ситуациях, когда гаптеновый антиген остается в растворе в условиях осаждения белка.

Адсорбция на твердых частицах

□ Иммунный анализ может быть гомогенным, т.е. проводиться в жидкой фазе, или гетерогенным, когда один из реагентов присоединен к твердой фазе.

Белки имеют тенденцию адсорбироваться на различных материалах, это свойство можно использовать для разделения. Целлюлоза, стекло и силика-гель — все они нашли применение для адсорбции белков. Классический способ удаления растворенного вещества из раствора—использование измельченного древесного угля, но в случае белков IgG адсорбция затрудняется из-за несоответствия между большим размером молекул белка и малыми порами угля. Древесный уголь модифицируют, покрывая его декстраном и IgG, и в растворе сохраняется комплекс IgG-антиген, тогда как антиген адсорбируется на древесном угле. В случае меченого антигена этим способом удаляют из раствора свободную метку, оставляя связанную метку для определения в растворе.

В некоторых случаях адсорбция антигена на древесном угле может стать конкурентным процессом, нарушающим равновесие. В любом случае ее мож-

19 Аналитическая химия. Том 1

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию