поверхностей для сравнительной иммобилизации, так что в анализе легко провести градуировку и автоматизацию, по крайней мере, частичную. Разработаны очень многие конкурентные или сандвичевые методы, использующие эти поверхности, покрытые антителом или антигеном.

Основным недостатком, особенно в случае микротитрующих пластин, является малая площадь поверхности для реакции. Пластины имеют емкость порядка 10% от емкости трубок, так что измеряемый при анализе сигнал должен быть достаточно велик, чтобы работать с этими малыми количествами. Независимо от этих ограничений, определения как с трубками, так и с пластинами проводили весьма успешно главным образом благодаря простоте их использования, а не благодаря характеристикам сигнала.

В качестве материала наиболее широко используют полистирол, а в некоторых случаях увеличивают емкость за счет высушивания на нем антитела; одним из главных достоинств является высокая степень адсорбции, несмотря на то, что площадь поверхности мала по сравнению с площадью частиц, обсуждавшихся выше. Однако это преимущество в адсорбции способствует также неспецифическому связыванию, так что определение всегда включает этап «блокировки», использующий белок, такой, как казеин, для связывания любых ненаселенных областей на поверхности полистирола после того, как была присоединена первичная распознающая молекула.

7.9.3. Метки Радиоактивные метки

□ Наиболее широко в качестве радиоактивных меток для иммунного анализа используют 1251 и 3Н.

Обычно в качестве метки выбирают 1251, 7-излучатель, или 3Н (тритий), ^-излучатель, хотя используют также 57Со (для витамина В12) и 14С. Тритий дает меньшую чувствительность, чем 1251, поскольку испускаемые 0-частицы слабы (£тах = 18,6кэВ; Еср = 5,5кэВ) и легко поглощаются стенками сосуда. 7-Лучн, испускаемые 125I (Е =28-35 кэВ), ие поглощаются сосудом, а эффективность счета при использовании сцинтилляционного счетчика обычно составляет около 80%.

В некоторых случаях метку можно присоединить путем простого изотопного замещения; в большинстве потенциальных определяемых веществ водород можно заместить на тритий, но природные определяемые вещества, содержащие иод (например, тироксин Т4), встречаются значительно реже. Следовательно, чтобы использовать в качестве метки 1251, обычно бывает необходимо присоединить его как «ярлык».

Белки

Простейший способ маркирования белков заключается в прямом замещении в ароматическом кольце тирозина или гнстидина. Однако распад радиоактивного нуклида передает молекуле энергию, которая превышает энергию химических связей, и, следовательно, существует опасность разрыва соседних связей и нарушения молекулярной структуры. Таким образом, хотя высокий уровень

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию