Частицы, рассеивающие свет, в качестве меток

□ Рассеяние света на частицах дает информацию о размерах частицы или агрегата, которую можно использовать для проведения иммунного анализа.

. Концепция агглютинации известна с 1920-х гг. в микробиологическом анализе. Этот принцип можно положить в основу образования комплекса между антителом и антигеном, где имеется поливалентное связывание. Поливалентный белок будет реагировать со своим антителом, образуя осаждающийся комплекс, но реакция в высокой степени зависит от таких факторов, как ионная сила и ионные частицы, и осложняется изменением реакционной способности различных антигенных связывающих центров на антителе: В принципе, по мере протекания реакции образование комплекса может приводить к изменению способности среды рассеивать свет, но в идеале комплекс должен оставаться во взвешенном состоянии.

Более удобным способом является использование частиц-меток для усиления светорассеивающих свойств меченого конъюгата. Когда частицу облучают монохроматическим светом, падающее поле вызывает флуктуацию диполя и свет рассеивается перпендикулярно оси диполя в направлениях, которые дают информацию о размере частицы. Характер рассеяния зависит от соотношения между объемом частицы и длиной волны. Если длина волны намного больше, чем частица, свет одинаково рассеивается во всех направлениях, но если размер частицы увеличивается, то интерсреренция рассеянного света в различных точках на частице уменьшает количество света, рассеиваемого обратно в сторону источника, и образует участки высокой интенсивности (рис. 7.9-9).

При измерениях, когда частицы находятся в броуновском движении, интенсивность света, собранного под фиксированным углом, флуктуирует в соответствии с этим движением, потому что она зависит от времени, которое нужно частице для диффузии на расстояние, сравнимое с длиной волны. Рассеянный под фиксированным углом свет имеет фазовый сдвиг и вектор рассеяния К определяется выражением

где п — показатель преломления фазы суспензии, а в - угол рассеяния. Интенсивность детектируемого света флуктуирует в масштабе времени, сравнимом с временем, за которое частица диффундирует на расстояние, достаточное для того, чтобы вызвать фазовый сдвиг иа 7г, причем это время обратно пропорционально К.

Рис. 7.9-9. Рассеяние света в направлении, перпендикулярном оси диполя, как функция объема частицы V.

(7.9-16)

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию