У Лм»1#*-i*i=»-» a,ni7J3 585

Наиболее распространенным металлическим «ярлыком» в этом метоле является золото благодаря его высокому показателю преломления и относительной простоте приготовления. Можно получить частицы одинакового размера в диапазоне от 5 до 60 нм. Однако латексные частицы также просты в получении, а кроме того, они обеспечивают большую гибкость при управлении их свойствами. Наилучшие характеристики получены при узком распределении размеров, так что суспензия в течение анализа поддерживается без излишнего перемешивания. Синтез проводят обычно одним из трех основных способов:

— полимеризация суспензии,

— полимеризация эмульсии,

— полимеризация набухшей эмульсии.

Процессы включают образование мицеллы поверхностно-активного вещества, которая принимает мономер и инициатор полимеризации. Средний размер частиц полученного полимера управляется концентрацией реагента, температурой и скоростью перемешивания. Мономеры с боковыми реакционными группами (например, акриловая кислота, -СООН; глипидилметилакрилат, эпоксигруппа; акриламид, -NH2) допускают последующее присоединение к антигену или антителу. Присоединение антитела к частицам показывает, что имеется оптимальная загрузка, и вне ее пределов стерические затруднения или обеднение поверхности антигеном (см. обсуждение методов поверхностной иммобилизации в разд. 7.8.2) снижает эффективность связывания. Сходные проблемы возникают также при присоединении к частицам антигена.

Эффекты неспецифического связывания могут также быть источником проблем. Изменение поверхности частиц влияет на агрегацию частиц и адсорбцию реагента, так что следует оптимизировать условия, чтобы уменьшить вандерваальсово притяжение между частицами, обеспечив достаточное куло-новское отталкивание, но не ингибируя реакцию антитело—антиген.

Флуоресцентные и хемилюмииесцентные клетки

□ Флуоресцентные метки обычно дают лучшую чувствительность, чем колориметрические, потому что длины волн возбуждения и детектирования различны.

Принципы работы с этими оптическими метками во многом те же, что и с радиоактивными метками, за исключением того, что метод детектирования включает тееттхфотометрическое измерение. Однако большинство прямых методов с колориметрической меткой, когда длины волн возбуждения и детектирования совпадают, редко достигают высокой чувствительности в иммунном анализе. Но можно получить улучшение на порядок величины, разделив эти длины волн. Существует дна основных класса меток, пригодных для этого; флуорофоры и хемилюминесцеитиые реагенты.

Флуоро4х)ры переходят на более высокий энергетический уровень при поглощении света в одном диапазоне длин волн; в возбужденном состоянии происходит быстрый безызлучательный переход в самое низкое возбужденное состояние и затем возврат в основное состояние с испусканием фотона с большей длиной волны (рис. 7.9-10,а, б); возбужденное состояние имеет типичное вре-

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию