Главная страница сайта Услуги решения задач по химии
Лекции по химии Учебник - общая химия


идентификации ряда соединений, которые увеличивают испускание света прн добавлении в реакционную среду.

Ферментные метки Общий принцип

□ Ферментные метки непосредственно не участвуют в измерении, но поскольку они вызывают превращение многих субстратных молекул на одну молекулу фермента, существует высокий потенциал усиления.

Ферменты служат, пожалуй, наиболее широко используемыми в иммунном анализе метками, однако они непосредственно не участвуют в измерении, в отличие от изотопов или флуоресцентных меток. Вместо этого, измерение может включать детектирование расхода ферментного субстрата или накопления продукта, требуя, таким образом, наличия в анализе другого реагента и привнося в метод дополнительные сложности. Тем не менее, поскольку одна молекула фермента может вызвать превращение многих молекул субстрата, имеется очень высокий потенциал усиления сигнала, и это преимущество перевешивает часто упоминаемый недостаток несовместимой оптимизации условий конечного этапа ферментативного анализа и связывания антитело—антиген.

Наиболее часто в качестве меток используют два фермента — щелочную фосфатазу (ЩФ) и пероксидазу хрена (ПХ). Выбор зависит от возможности оптического детектирования превращения субстратов этих ферментов и от легкости соединения фермента без потери активности. Щелочная фосфатаза представляет димерный гликопротеин с молекулярной массой 140 ООО, содержащий много свободных аминокислот для соединения. Аналогично пероксидаза хрена содержит четыре лнзнновых остатка для соединения и имеет молекулярную массу 44000. В некоторых случаях для соединения можно использовать углеводные остатки.

Разработаны методы соединения фермента с антителом или антигеном в соответствии с конечным вариантом и специальными требованиями иммунного анализа. Существуют два главных подхода: гомобифункциональные агенты и гетеробифункциональные агенты. Многие из используемых реагентов те же, что и уже рассмотренные при образовании конъюгатов с радиоактивной меткой (см. табл. 7.9-2), и здесь можно применить похожее рассмотрение за исключением того, что в этом случае конъюгат образует связь с белком-меткой. Может оказаться необходимым защитить активное место фермента в процессе соединения за счет включения субстрата фермента в процессе приготовления; это особенно важно, когда происходит соединение фермента с гаптеном, поскольку гаптен может образовать связь или закрыть активное место, маскируя места распознавания и гаптена, и фермента.

Соединение с гаптеном должно, вообще говоря, использовать ту же группу, что и для образования иммуногена в первом случае, так чтобы лиганд не маскировал место распознавания. Например, в большинстве определений гидрокортизона применяют сыворотку, полученную с помощью конъюгата кортизон-3-(0-карбоксиметил)оксима, поскольку это оставляет уникальное 17 положение D-кольца доступным для распознавания, создавая, таким образом, специ-



 

Вернуться в меню книги (стр. 501-607)

 

Решаем контрольные работы по химии
Срочно нужно решить задачи по химии, выполнить контрольную работу или написать реферат? Тогда вам сюда.

 

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию