Аналитическая химия. Проблемы и подходы. Р. Кельнер

фичность к кортжостероидной структуре (рис. 7.9-15). Конъютат же с гаптеном, меченый в положении С-21, не проявляет затем сродства к антителу, так что этот анализ терпит неудачу.

□ Присоединение ферментной метки не должно блокировать место распозна-

Точно так же, как может потребоваться разделяющая молекула между гаптеном и белком для образования иммуногена, способность меченого конъюгата к связыванию с антителом можно улучшить, если поместить подходящий разделитель между гаптеном и ферментом. Наиболее популярным гомобифунк-циональным агентом для присоединения фермента является глутаровый альдегид, но он склонен к образованию очень гетерогенных комплексов, с существенным кросс-линкингом фермент-фермент наряду с желаемым фермент-конъюгат. Гетеробифункциональные агенты позволяют обойти эту проблему с различной степенью успеха, зависящей от относительной реакционной способности разных групп. Широко используют N-гидроксисукцинимидный эфир дималеимида и карбодиимиды, но доступны многие другие соединительные агенты (см. также разд. 7.8.2).

Интересным развитием идеи использовать ферментные метки является контроль соотношения «связанный:свободный> путем изменения активности фермента в результате связывания в конъюгат с антителом или дополшггельного связывания антиферментных антител. Такие способы анализа не нуждаются в этапе разделения, а значит, можно упростить проведение определения. Разработано несколько способов гомогенного ферментативного иммунного анализа

Умножающий ферментативный иммунный анализ (УФИА) В конкурентном анализе гаптен, меченный ферментом, может конкурировать с гаптеном пробы за ограниченный запас антигаптеновых антител. Если связывание антитела с гаптеновым конъюгатом ингибирует активность фермента, то чем выше концентрация гаптена в пробе, тем меньше связывание антитела с конъюгатом, и, следовательно, тем меньше ингибирование (рис. 7.9-16). В первом варианте метода УФИА разработанном для морфина, в качестве фермента, чувствительного к ингибированию, использовали лизоцим, но было найдено, что глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназа является наиболее эффективной для этого метода в отношении изменения ферментативной активности. Прн-

Рис. 7.9-15. Гидрокортизон, иллюстрирующий общую структуру стероидов, с уникальным центром «распознавания» для гидрокортизона в С-17. Соединение через С-3 не маскирует этот центр.

Решаем контрольные работы по химии
Срочно нужно решить задачи по химии, выполнить контрольную работу или написать реферат? Тогда вам сюда.

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию

Главная страница сайта	Услуги решения задач по химии
Лекции по химии	Учебник - общая химия