Аналитическая химия. Проблемы и подходы. Р. Кельнер

ления, образуется стехиометрнческое количество продукта, н количество продукта накапливается по мере протекания анализа.

□ Для проведения колориметрического иммунного анализа с ферментной меткой ферментативная реакция должна приводить к образованию окрашенного продукта.

Принципиальная идея здесь заключается в том, что ферментный субстрат следует превратить в окрашенный продукт. В случае щелочной фосфатазы обычно используют n-нитрофенилфосфат или аналогичный ароматический фосфат:

но показано, что пероксидаза хрена проявляет ббльшую чувствительность. В последнем случае метка действует как косубстрат с пероксидом и донором водорода. Конечным продуктом является окисленный донор водорода, который выбирают в соответствии с его способностью поглощать в видимой области. В табл. 7.9-5 приведены распространенные косубстраты пероксидазы, имеющие подходящие абсорбционные характеристики в окисленном виде. 3,3', 5,5'-Тетраметал6ензидин (ТМБ) дает наибольшее поглощение и наиболее низкий фон в сравнении с многими другими используемыми субстратами, такими, как 2,2'-азинобис(этилбензотназолин-6-сульфонат) (АБТС) или о-фенилендиамин.

Щелочная фосфатаза (ЩФ) больше подходит для флуоресцентных измерений, чем пероксидаза хрена (ПХ). Наиболее часто применяемым субстратом служит 4-метилумбеллиферилфосфат, который испускает свет прн 448 нм прн возбуждении на длине волны 365 нм. Следовательно, преимуществом ЩФ является то, что флуоресцирующее соединение можно фосфорилнровать, создав, таким образом, флуорофорный субстрат для довольно неспецифнчного фермента ЩФ. В принципе, можно синтезировать широкий класс флуорофоров с различными флуоресцентными свойствами и временами затухания в качестве подходящих субстратов для ферментной метки. Такой ферментативный подход

Решаем контрольные работы по химии
Срочно нужно решить задачи по химии, выполнить контрольную работу или написать реферат? Тогда вам сюда.

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию

Главная страница сайта	Услуги решения задач по химии
Лекции по химии	Учебник - общая химия

7.9. Иммунный анализ	597
Таблица 7.9-5. Косубстраты пероксидазы для колориметрического детектирования
Косубстрат	Хтах (окисленная форма), нм
2,2'-азинобис(этилбензотиазолин-6-сульфонат) (АБТС)	415
о-Фенилендиамин (ОФД)	492 (подкисленная)
3,3*, 5,5'-Тетраметилбензидин (ТМБ)	450 (подкисленная)