Главная страница сайта | Услуги решения задач по химии |
Лекции по химии | Учебник - общая химия |
ную природу проблемы. Может быть несколько источников ошибок, каждый из которых может проявляться различным образом.
Эффективная концентрация определяемого вещества
□ Следует позаботиться об обеспечении оптимальных условий анализа с целью уменьшения ошибок.
В иммунном анализе определяемое вещество должно участвовать в равновесии связывания с распознающей молекулой. Если это связывание нарушено или если определяемое вещество вовлечено в связывание с другими молекулами, эффективная концентрация определяемого вещества оказывается заниженной. Во многих случаях определяемое вещество в пробе существует как в свободной, так и в комплексной формах; например, многие гормоны могут быть в равновесии с комплексом гормон-глобулин или гидрофобные стероиды могут быть распределены в липидных полостях. В первом случае эффект обычно преодолевают, добавляя блокирующий агент, тогда как липидный захват разрушают присоединением селективных поверхностно-активных веществ.
Однако, если не позаботиться о том, чтобы все определяемое вещество в пробе было в свободном виде, тогда предварительная обработка (или хранение) пробы может существенно влиять на результат. Тироксин (Т4) и многие другие малые молекулы почти полностью связаны с белком, но вытесняются с помощью неэтерифицированных жирных кислот. Поскольку эти жирные кислоты образуются при хранении пробы из-за воздействия липаз, то определение тироксина может стать скорее способом оценки возраста пробы, чем уровня определяемого вещества.
Комплексообразование может также включать ионы, а не белки или ли-пиды, но в этом случае отсутствие комплекса может быть источником проблем, поскольку многие белковые определяемые вещества содержат центры связывания двухвалентных катионов, и антитела, выращенные на эти белки in vivo, могут распознавать конфигурацию, удерживаемую катионным комплексом (главным образом, Са2+ или Mg2+); таким образом, в отсутствие этих катионов конформация может измениться, так что распознавание с антителом становится неэффективным и анализ терпит неудачу.
Эффективность связывания антител
Для данного антитела на связывание антигена влияет наличие активного центра и его конформационная целостность. Связывание большее, чем ожидаемое, может также являться результатом неспецифического взаимодействия с определяемым веществом. В случае систем твердофазного анализа использование поверхностно-активных веществ, чтобы сделать поверхность менее гидрофобной, может уменьшить вторую проблему, но высокая концентрация поверхностно-активного вещества может привести также к потере антител, если они связаны нековалентно.
Как во всех методах анализа, всегда существует полезный рабочий диапазон, в пределах которого анализ имеет значимость. Для сандвичевых определений очень высокие концентрации определяемого вещества приводят к насы-
|
Решаем контрольные работы по химии |
Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru
Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию