щению как захватывающего Тек и контрольного антитела, так что кажущаяся измеренная концентрация «саылгича» захватывающее антитело ■ определяемое вещество/контрольное антитело оказывается ниже, чем ожидаемая (рис. 7.9-21). Это явление называют эффектом высокой дозы.

В конкурентном анализе наблюдается эффект низкой дозы, когда связывание меченого антигена при низкой концентрации антигена в пробе больше, чем в отсутствие определяемого вещества, из-за положительной кооперации.

Менее предсказуемыми оказываются ошибки за счет эндогенных антител, способных связывать один из аналитических реагентов. Эта проблема подобна тем, которые встречаются при эндогенном связывании антигена, обсуждаемом выше, но здесь возможные меры менее очевидны. Сандвнчевый анализ в наибольшей степени подвержен мешающему влиянию гетерофильных антител IgG и IgM в пробе, способных присоединяться к захватывающему антителу и предоставлять активный центр контрольному антителу. Существование такой проблемы неудивительно, так как антитела к животному IgG в пробе могут перекрестно реагировать с реагентными антителами, но введение сьшоротки или иммуноглобулинов из тех же частиц, что и реагенты, обычно эффективно предотвращает мешающее влияние этого типа. Альтернативным подходом является использование только Fab-фрагмента, содержащего специфический активный центр в качестве контрольного антитела взамен целой молекулы IgG, что помогает избежать образования ложного сигнала.

Ошибки образования сигнала

Основным источником ошибок при образовании сигнала является какое-либо ингибирование метки. Например, флуорофор может тушиться эндогенными частицами пробы или на ферментную метку может влиять присутствие ингибиторов либо усилителей. Как было показано ранее прн обсуждении, эти

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию