жен быть выбран согласно предполагаемому количеству пробы и объему пика в ЖХ, а также согласно силе поля и ядру, по которому будут проводить детектирование в прямом или обращенном варианте.

Обычно проточная ячейка имеет внутренний диаметр 2-4 мм (3-5 мм внешний диаметр) и рабочий объем около 60-250 мкл. Хотя, с хроматографической точки зрения диаметр проточной ячейки должен быть как можно меньше, чтобы предотвратить перемешивание элюента и размывание пиков (особенно для режима остановленного потока), 5-мм головка зонда наиболее подходит для ЖХ-ЯМР при 7 Тл (300 МГц для 1Н). Головку зонда с внешним диаметром 4 мм можно считать резонным компромиссом между хорошей чувствительностью и малым перемешиванием элюента при работе с высокими частотами. Очевидно, что размер пробы, объем проточной ячейки и скорость потока должны подбираться так, чтобы достичь максимальной чувствительности. Головки с диаметром 3 мм наилучшим образом подходят для детектирования в режиме остановки потока при меньших объемах пиков, получаемых в микроколоночной ЖХ.

□ Размер проточной ячейки для ЖХ-ЯМР должен быть выбран с учетом хроматографического разрешения, скорости потока и силы магнитного поля ЯМР.

Проба должна провести в магнитном поле определенное время, при этом ядра поляризуются перед попаданием в проточную ячейку. Как результат ограниченного времени пребывания ядра в проточной ячейке по сравнению со статическими измерениями сокращаются времена спин-спиновой и спин-решеточной релаксации. Это приводит к возрастанию сигнала при увеличнии скорости потока. Этот эффект, однако, противоположен уширению спектральных линий при возрастании скорости потока, что требует нахождения компромиссных условий.

Следующая мера для достижения максимальной чувствительности - принимающая спираль должна быть прикреплена непосредственно к проточной ячейке. Это также обеспечивает высокую стабильность полученного сигнала.

Выбор подходящего растворителя для ЖХ-ЯМР очень важен, поскольку растворители, обычно используемые в экспериментах по ЯМР, либо дейтери-рованы и, следовательно (за исключением D2O), слишком дороги, чтобы быть использованы для ВЭЖХ-разделения, либо они апротонные (CHCI3, фреоны) и поэтому не универсальны для использования в нормально-фазовом варианте. Использование протонированных растворителей требует подавления сигнала растворителя. Хотя в ЯМР для этого существует ряд методов, основанных на различиях в химических сдвигах (например, методы селективного насыщения, селективного возбуждения или композитный импульсный) или на различиях во временах релаксации (например, прогрессивное насыщение или спин-эховый метод), ни один из них полностью не подходит для ЖХ-ЯМР. Это подавление не столь важно при изократическом разделении, но весьма существенно при градиентном элюировании, когда частоты резонанса изменяются с изменением состава растворителя. В коммерчески доступных приборах проблема подавления растворителя решается при использовании адаптивных экстраполяцион-ных методов, которые во время хроматографического анализа рассчитывают

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию