Два из этих соединений напрямую идентифицируются из масс-спектров с ионизацией термораспылением: N-оксид (JV* 1) и гидроксисоединение JV« 2 (доступны образцы сравнения). Различить остальные три изомера можно только при использовании ЖХ-МС-МС. В этом случае использовали режим сканирования дочерних ионов, при этом МС1 выделял протонированные молекулы, содержащие атомы 81Вг, с m/z = 460, а МС2 работал в сканирующем режиме; разделение изомеров проводили при помощи жидкостной хроматографии. Полученные результаты приведены в табл. 9.4-10. Метод затем применили для анализа метаболитов темеластина в экстрактах фекалий человека.

Рутинный анализ конъюгатов лекарственных веществ методом ЖХ-МС с ионизацией термораспылением был невозможен, но внедрение ионизации электрораспылением позволило применить этот метод для определения неразрушенных глюкуронидных и сульфатных конъюгатов. Чувствительный и селективный мониторинг глюкуронидов и сульфатов при исследовании метаболитов лекарственных веществ можно осуществить и применяя сканирование нейтральных молекул по потерям масс 176 (разрыв гликозидной связи С-О) и 80 (отрыв SO3) соответственно.

Определение параметров биологических макромолекул

□ Развиваемое в настоящее время направление в аналитической масс-спектрометрии связано с определением параметров биологических макромолекул.

Одним из чрезвычайно интересных новых областей приложения масс-спектрометрии, которые активно изучается в настоящее время, является биохимия, или, точнее, определение параметров белков. Это является результатом внедрения таких методов, как MALDI и ионизации электрораспылением, которые обеспечивают экспрессное и точное определение средних молекулярных масс белков при малом количестве материала (на уровне пикомолей или ниже). Определяют среднюю молекулярную массу белка, так как для разделения различных изотопных пиков потребовалось бы спектральное разрешение по массе свыше 10000. В сравнении с другими, более традиционными биохимическими методами для определения молекулярной массы биологических макромолекул, такими, как SDS-PAGE и гель-проникающей хроматографии, масс-спектрометрия обеспечивает быстрое и легкое измерение, требующее малых количеств материала и обеспечивающее непревзойденную точность. Однако масс-спектрометрия является деструктивным методом, и использованный образец нельзя восстановить для последующих экспериментов.

MALDI и ионизация электрораспылением сильно различаются по виду предоставляемой информации. Спектр MALDI относительно прост, в нем присутствует интенсивный пик изучаемого белка с m/z, соответствующим однозарядному иону (см. рис. 9.4-6,6"). Кроме того, в спектре могут находиться менее интенсивные пики, соответствующие многозарядным ионам, например [М + 2Н]2+ и димерам, связанным водородной связью, т. е. [2М + Н]+. С использованием подходящих (внутренних) стандартов можно достичь точ-

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию