ности определения массы около 0,1%. Спектр ионизации электрораспылением содержит пики многозарядных ионов, составляющих ионный конверт (см. рис. 9.4-6,в), из которого можно рассчитать молекулярную массу. Полагая, что соседние пики в ионном конверте различаются на один заряд и что появление заряда вызвано протонированием, можно вывести соотношение между массой пика многозарядного иона при m/z = р\ и относительной молекулярной массой Мг:

p\Zi = Mr + mHZi (9.4-26)

где тн —масса протона, Zi — число зарядов. Соседний пик с более высоким значением m/z, чем у pi описывается уравнением

Р2& - 1) = Mr + mn(zi - 1) (9.4-27)

Это множество уравнений можно решить относительно Zj, что приводит к

= fc^H) (9.4-28)

Молекулярную массу затем рассчитывают, подставляя целую часть вычисленного значения z< в уравнение 9.4-26. Существуют более точные компьютерные алгоритмы, которые преобразовывают полученный масс-спектр в спектр, состоящий из одного пика, соответствующего молекулярной массе белка. Определение молекулярной массы белка важно само по себе, например вследствие того, что молекулярная масса может легко указать на природу рекомбинант-ного продукта.

Как MALDI, так и ионизацию электрораспылением можно легко сочетать с ферментативным расщеплением белков для последующего определения их параметров. После расщепления белка полученная смесь целиком помещается в MALDI-спектрометр и анализируется. В наиболее благоприятных случаях можно определить массу более чем 90% пептидных фрагментов. Этот подход можно использовать для определения изменений в белке, например при определении параметров рекомбинантных белков или для идентификации ковалентно-связанных модификаторов белка. Масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением, вследствие того, что она легко сочетается как с ЖХ-МС, так и тандемной масс-спектрометрией, может быть источником еще и дополнительной информации о последовательности аминокислот в белке. При химической ионизации пептид фрагментируется на два комплементарных ряда ионов, которые имеют последовательности аминокислот, начиная с С- и N-терминальных атомов пептида. Тандемная масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением оказывается более экспрессной и находит более разнообразное применение, чем традиционные биохимические методы, такие, как последовательное отщепление аминокислот по методу Эдмана.

Это новое приложение масс-спектрометрии развилось в течение последних нескольких лет. А значит, в будущем можно рассчитывать на существенный прогресс в данной области исследования. Принимая во внимание современную скорость развития данных отраслей науки, мы решили уделить особое внимание этим относительно новым разработкам, так как можно ожидать, что такие

Copyright © 2007-2012 Zomber.Ru

Использование материалов сайта возможно при условии указания активной ссылки
Решить химию